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細胞有絲分裂的實驗方法

更新時間:2015-12-31 點擊量:933

(一)試驗原理

    細胞有絲分裂指數(mitotic index,MI)是指屬于分裂期的細胞占總細胞數的百分率.用于表示細胞增殖旺盛的程度,也可用于檢測藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培養法培養細胞,做固定和染色后,鏡下觀察和計數000個細胞中處于分裂期的細胞數并計算MI。

(二)材料

.待檢材料(藥物)。

2.細胞培養成層的貼壁細胞。

3.試劑 甲醇、3%吉姆薩染液。

4.器材CO2培養箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2.2 cm×2.2 cm,需預先清洗和滅菌處理)、塑料培養皿(3.5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。

(三)實驗方法

.將細胞消化成單個細胞懸液,將細胞懸液分瓶培養,分成不加藥的對照組和加人不同劑量藥物的實驗組。

2.細胞傳代培養的方法培養細胞,并制成濃度為05/ml的細胞懸液。

3.將清洗和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培養皿中,將細胞懸液搖勻后接種于培養皿中,各皿中接種量相同。

4.分別于培養24 h、48ht和72h后從培養皿中取出蓋玻片,在Hanks液中漂洗2~3次。

5.先用甲醇固定30 min,再用吉姆薩染液染色。晾干后用中性樹膠封片。

6.油鏡下或高倍鏡下計數000個細胞中處于分裂期的細胞數。

7.計算MI按下列公式計算MI。

(四)結果與分析

    將對照組和藥物組的實驗結果繪制成直方圖并加以比較,也可繪制成MI曲線進行比較:

(五)注意事項

.為了減少誤差,實驗者必須熟悉各期分裂象細胞的形態特征,該實驗自始至終由一人完成,當兩人以上觀察時,應掌握相同的標準。

2.MI曲線與細胞生長曲線趨勢基本相似,但不*相同。如果在細胞增長達飽和密壁并進入停止期后.細胞數量很多,而分裂象細胞可*消失。

3.細胞在蓋玻片上的密度常不均勻,細胞密集區與區的分裂象細胞數目可能不同。計數時要選擇密度近似區,以減少實驗誤差。

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