實(shí)驗(yàn)原理

用elisa試劑盒抗人μ鏈包被微孔板，以捕獲待檢血清中IgM，加入乙腦病毒抗原與其特異性IgM結(jié)合，再用酶標(biāo)抗乙腦病毒抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色。

主要試劑與器材

.病毒抗原的制備與純化：用乙腦病毒高毒株接種乳鼠或幼鼠，瀕死前取腦組織，pH9.0硼酸緩沖液配成0%懸液。0000rpm離心30min，取上清液，按-3mg/ml加，置4℃2h6000rpm，將沉淀物加入原病毒懸液/20體積的離散劑STE緩沖液（EDTA 0.029g，NaCl 0.75g，0.05mol/L pH9.0Tris-HCl00ml）充分碾磨，置4℃2h。高速離心，取上清液，按:5000終濃度加入NaN3，用前進(jìn)行方陣滴定。對照抗原用正常鼠腦同法制備。

2.elisa試劑盒中抗血清吸收：用乙腦病毒株免疫鼠，制備高價(jià)免疫血清。每毫升血清加鼠腦干粉0.g，新鮮補(bǔ)體00μl，時(shí)時(shí)振搖。4℃2h，再置37℃水浴中h（不斷振搖）。高速離心，取上清液，以吸收組織抗體。

3.抗血清純化：將份血清加份生理鹽水，在攪拌下滴加2份飽和硫酸銨溶液，于4℃靜置2h后，2000rpm離心20min，吸棄上清液，重復(fù)上述2-3次。

4.酶標(biāo)鼠抗乙腦病毒IgG抗體：將上述提純的抗體IgG組分，用辣根過氧化物酶以過碘酸鈉法進(jìn)行標(biāo)記。

5.其他：抗人μ鏈單抗、待檢血清或腦脊液、底物溶液（TWB-H2O2）、終止液（2mol/L H2SO4）等。

操作步驟

.包被抗人μ鏈單抗：用經(jīng)適當(dāng)稀釋的抗人μ鏈單克隆抗體包被微孔，每孔00μl，37℃h后4℃2h，洗3次。

2.加樣：用含4%羊血清的PBS-T稀釋待檢血清，作:0和:00兩個(gè)稀釋度。每孔00μl，37℃3h，洗3次。

3.加抗原：用含4%羊血清的PBS-T稀釋抗原，每孔00μl。37℃2h后4℃2h，洗3次。

4.加酶標(biāo)抗體：用含0%羊血清的PBS-T稀釋酶標(biāo)豚鼠抗乙腦病毒抗體，每孔加00μl。37℃2h，洗4次。

5.加底物：加TMB-H2O2底物溶液，每孔00μl，室溫20-30min。

6.終止反應(yīng)：加2mol/L H2SO4，每孔50μl，終止反應(yīng)。

結(jié)果分析

用酶標(biāo)儀測450nm波長吸光度。P/N≥2.為陽性。