產品名稱 | 大鼠胚胎成纖維細胞 | 組織來源 | 胚胎組織 |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X1215 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
大鼠胚胎成纖維分離自胚胎；成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的胚胎成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細胞常用作ES細胞培養常用的飼養層細胞，能產生抑制ES細胞自主分化和促進ES細胞增殖的因子，故能有效地促進ES細胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優于外源添加的一些因子，而且可以為ES細胞的培養提供類似于體內的微環境，故在研究哺乳動物ES細胞中得到廣泛使用。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠胚胎成纖維采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠胚胎成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
本公司所有產品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。
小鼠雜交瘤細胞；13D4 | 小鼠雜交瘤細胞；WNSs239F1A8 |
小鼠雜交瘤細胞；2A6 | 5%牛血清白蛋白溶液（不含脂肪，0.85%NaCl，無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；GZHMD1F10 | 10%牛血清白蛋白溶液（不含脂肪，0.85%NaCl，無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；8G9 | 30%牛血清白蛋白溶液（不含脂肪，0.85%NaCl，無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；20A11 | 20%牛血清白蛋白溶液（不含脂肪，0.85%NaCl，無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；7C3 | 35%牛血清白蛋白溶液（不含脂肪，0.85%NaCl，無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；HAb18Gedomab2 | 1%牛血清白蛋白溶液（0.85%NaCl，無菌） |
人子宮內膜低分化腺癌細胞；EAG3 | 5%牛血清白蛋白溶液（0.85%NaCl，無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；BmIFV－4E12 | 1%牛血清白蛋白溶液（不含脂肪，0.85%NaCl，無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；BDRXN-2 | 50% PEG20000水溶液（非無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；VEGF | 50% PEG10000水溶液（非無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；CHGF-001 | 50% PEG8000水溶液（非無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；CHGF-002 | 大鼠胚胎成纖維細胞50% PEG6000水溶液（非無菌） |
小鼠雜交瘤細胞；3F16A4 | 50% PEG4000水溶液（非無菌） |
地高的盒子I | 50% PEG3350水溶液（非無菌） |
