谷研試劑-縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤免疫組化和DNA倍體研究

摘要　目的：研究縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤的臨床病理、免疫組化及DNA倍體的表現。方法：采用常規石蠟切片、HE染色及免疫組化染色ABC法。另對6 μm厚石蠟切片采用Feulgen染色，應用細胞影像儀對腫瘤細胞核的DNA倍體進行測定。結果：腫瘤細胞特點為瘤細胞較大，呈彌漫分布，其間可見寬窄不一、成束或帶狀的纖維結締組織穿插分割。免疫組化染色瘤細胞表達LCA及L26陽性，IgA及κ弱陽性。經細胞影像儀測定瘤細胞DNA呈高異倍體，DNA質量的分布呈高度異質性。結論：來源于胸腺B淋巴細胞。腫瘤細胞DNA倍體測定結果對于患者預后的判斷可能具有非常重要的意義。
關鍵詞　縱隔腫瘤；淋巴瘤；DNA倍體；免疫組織化學
中國圖書分類號　R734.5； R733.4　　文獻標識碼　A　　文章編號　00-7399（999）0-002-03

Immunohistochemistry and DNA ploidy of primary large B cell lymphoma in mediastina

Lü Xiang, Meng Fanqing, Zhou Siqiao et al
(Nanjing Drum Tower Hospital, The Affiliated Hospital of Nanjing Univerisity Medical School, Nanjing　20008)

ABSTRACT　Purpose　To investigate the characteristics of clinicopathology, immunohistochemistry and the DNA ploidy measurement for the primary large B cell lymphoma in mediastina. Methods　The routine paraffin slides were cut and stained with HE as well as ABC immunohistochemical technique. In addition, the 6 μm thick paraffin slides were cut and stained by Feulgen method. Then the DNA ploidy of tumor cells were measured with image cytometer. Results　The morphological characteristics of tumor cells were that the sheets of diffusely distributed large lymphocytes were penetrated by bundles of fibroconnective tissue. In immunohistochemically stained slides, the tumor cells were LCA and L26 positive, IgA and κ weakly positive. The DNA ploidy measurement results showed that the tumor cells were high aneuploidy and the distribution of DNA contents were highly heterogeneous. Conclusion　The neoplasm may originate from the B lymphocyte in thymus. The result of the DNA ploidy measurement of the tumor cells suggests that it might have very great significance for the prediction of the prognosis of the patient.
KEY WORDS　mediastina; lymphoma; DNA ploidy; immunohistochemistry

縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤罕見，國內鮮有報道。我們對例縱隔原發性大B細胞性淋巴瘤進行了臨床病理、免疫組化及DNA定量測定的研究，現報道如下。

　材料和方法

標本采用0%甲醛固定，常規石蠟切片，HE染色及Giemsa染色，光鏡觀察，并對石蠟切片采用ABC法進行免疫組化染色。所采用的單克隆抗體由Dako公司提供。另對6 μm厚石蠟切片采用Feulgen染色，以腫瘤周圍殘存的正常胸腺淋巴細胞作為內對照，用細胞影像儀對腫瘤細胞的倍體進行測定，測定時采用的光源波長為560 nm。

2　結果

2.　臨床資料　患者男，35歲，漸起干咳3周。體檢：頸靜脈怒張，全身淺表淋巴結、肝、脾不腫大。骨髓穿刺檢查未見異常。胸片顯示上縱隔增寬，見向兩側突起密度均勻的陰影。側位片見腫瘤位于前上縱隔。CT檢查見：前上縱隔腫塊大小5.5 cm×5 cm×5 cm，與周圍組織境界模糊。手術中見腫瘤位于胸腺部位，表面灰白色，高低不平，質硬，與周圍組織分界不清，廣泛浸潤周圍組織和胸骨。上腔靜脈亦被包裹在腫瘤組織內，肺組織未見浸潤。
2.2　病理檢查　肉眼見送檢腫瘤組織3塊，大者3.6 cm×2 cm×.5 cm，小者 cm× cm× cm。表面粗糙高低不平，灰白色，切面灰白色，質硬。鏡下見：腫瘤細胞呈彌漫散在分布。腫瘤內見可見寬窄不一、束狀、玻璃樣變性的纖維組織穿插于瘤細胞之間把瘤組織分割成不規則片塊狀。瘤細胞較大，大小形態較一致。細胞核大，呈圓形、卵圓形及略不規則形，核膜清晰。核染色質呈粗顆粒狀，核可見嗜酸性小核仁。核分裂象個/0HPF。瘤細胞胞漿較豐富，淡伊紅色，細胞境界不清。瘤細胞間可見少數不規則分布的小血管。Giemsa染色瘤細胞漿呈紫藍色，胞漿內未見顆粒。腫瘤內可見大片壞死，在腫瘤的邊緣可見瘤細胞浸潤周圍脂肪結締組織，并可見少量萎縮的胸腺組織。
2.3　免疫組化　瘤細胞表達LCA陽性、L26陽性、IgA及κ弱陽性。瘤細胞表達IgM、IgG、λ、UCHL、Mac387、cytokeratin、vimentin及p53陰性。
2.4　腫瘤細胞DNA定量測定　腫瘤細胞呈高異倍體，DNA質量的分布呈高度異質性。瘤細胞DNA質量主峰值為7.95 pg，DNA指數為2.50，變異系數0.22；瘤細胞DNA質量次峰值為9.68 pg，DNA指數為.35，變異系數為0.55。

3　討論

縱隔內原發性淋巴瘤罕見，其大多數為淋巴母細胞型淋巴瘤〔〕，而原發性大B細胞性淋巴瘤則極少見。其臨床特點為：患者以年輕女性多見〔2〕，發病年齡23～75歲，平均33歲〔〕?；颊呖捎锌人?、胸痛、呼吸困難以及靜脈阻塞綜合征等。腫瘤位于前縱隔，并傾向于浸潤周圍組織。本例臨床表現及生物學行為特點均與文獻報道一致。
本例腫瘤在光鏡下zui顯著的特點為：瘤細胞較大，形態一致，呈彌漫散在分布，瘤細胞間常有寬窄不一、硬化的纖維組織束帶穿插分割。細胞核呈圓形、卵圓形及不規則形，核仁圓而清楚，細胞漿較豐富，弱嗜堿性。腫瘤內常見壞死，核分裂象可達～4個/HPF。Kurita等〔3〕報道腫瘤印片May-Giemsa染色在大多數瘤細胞胞漿內可見嗜苯胺藍顆粒。電鏡下的特點為瘤細胞胞漿豐富，含有一些線粒體、核糖體和少量粗面內質網。大多數瘤細胞胞漿內含中等大小的(直徑<0.7 μm)有膜包裹的電子致密顆粒。在一些細胞內可見較大的有膜包裹的電子透明顆粒。由于其電子致密顆粒形態類似于大顆粒淋巴細胞及大顆粒淋巴細胞白血病/淋巴瘤細胞內的溶酶體，故Kurita認為嗜苯胺藍顆?？赡軄碓从谌苊阁w。
關于該腫瘤的起源，目前多認為其可能來源于胸腺內B淋巴細胞〔2，3〕。胸腺髓質內B淋巴細胞可陽性表達所有B淋巴細胞標記，并可表達IgM、IgD陽性，偶而IgA陽性，但IgG陰性。Kurita等的病例瘤細胞表達CD20、CD22、CD23、CD24、OKDR和PCA陽性，CD9和CD20陰性，說明其來源于胸腺B淋巴細胞。文獻報道由于瘤細胞可表達漿細胞抗原標記PC和PCA陽性，提示其為向B細胞分化的終末細胞〔2，3〕。本例腫瘤位于胸腺部位，周圍可見殘留的胸腺組織，免疫組化染色瘤細胞表達B淋巴細胞標記陽性，支持其起源于胸腺B淋巴細胞。
鑒別診斷：()霍奇金?。浩潆m以女性青年多見且多為結節硬化型，但其有典型的雙核R-S細胞及其它各型R-S細胞，背景細胞多樣化，有較多的反應性淋巴細胞及組織細胞，免疫組化染色瘤細胞表達Leu-M及Ki-陽性。本例腫瘤細胞形態較單一，不見以診斷性R-S細胞為代表的系列腫瘤細胞。瘤細胞表達B淋巴細胞標記陽性。(2)胸腺瘤：有上皮細胞及淋巴細胞兩種細胞成分，上皮性細胞形態多樣，可呈梭形，瘤細胞可表達keratin、Leu-7和CEA陽性及thymulin和thymosin α陽性。本例腫瘤只見單一細胞成分，不見梭形細胞，瘤細胞呈彌漫散在分布，無排列成巢的趨勢，瘤細胞表達上皮性標記陰性。(3)精原細胞瘤：其好發于男性，男女之比5∶。瘤細胞胞境界清楚，核仁大而明顯，可排列成小巢狀或不規則腺泡狀及梁索狀，間質內淋巴細胞浸潤較明顯，可見上皮樣肉芽腫，瘤細胞表達胎盤堿性磷酸酶、Leu-7陽性。本例腫瘤則以女性多見，瘤細胞呈彌漫散在分布，核仁較小而細胞境界不清，瘤細胞表達B淋巴細胞標記陽性。(4)間變性大細胞淋巴瘤：70%的間變性大細胞淋巴瘤可累及縱隔〔4〕，其腫瘤細胞形態多樣化，常有花冠狀多核巨細胞、胚胎樣巨核細胞，瘤細胞表達CD30(Ki-或HerH2)陽性。本例腫瘤形態較單一，不見花冠狀巨核細胞和胚胎樣巨核細胞，瘤細胞表達CD30(Ki-或HerH2)陰性。
本例腫瘤細胞DNA呈高異倍體，DNA質量的分布呈高度異質性。DNA質量主峰值為7.95 pg，DNA指數為2.50，次峰值為9.68 pg， DNA指數為.35，手術時見腫瘤在縱隔內廣泛浸潤性生長并浸潤胸骨，反映了腫瘤細胞呈高度惡性。文獻亦報道該腫瘤預后差〔〕，大多數病例抗腫瘤治療效果不佳。患者存活時間4～22個月，平均僅存活6個月〔2〕。該腫瘤的治療以為主，Lavabre-Bertrand等認為，盡管在開始階段就應對腫瘤進行積極的，然而放射治療或手術治療亦屬必要，因為腫瘤可較長時間內僅局部發展〔〕。